REVUE 08/09.book

This paper describes a preliminary study to demonstrate the application of sex determination of bovine embryos using Polymerase Chain Reaction (PCR) in field conditions in Turkey. Three cows were selected according to their fertility records and physical examinations and were super ovulated following oestrus synchronization after artificial insemination. Six embryos were collected using the standard uterine flushing technique. Biopsies were taken after the stabilization of the embryos by scratching the bottom of the Petri-dish with a micro-blade without using a micromanipulator. PCR was performed on the biopsy samples. A PCR product of 279 bp was amplified from DNA isolated from the blood of a bull. The same PCR amplicon was detected in 4 of the morula stage embryos collected from synchronized cows. In contrast the PCR product was not amplified from DNA isolated from two of the morula stage embryos and blood of a cow. A bovine G3PDH PCR product of 579 bp was detected in DNA isolated from the blood of both a bull and a cow. PCR results have shown that four of the six morula stage embryos from synchronized cows were male and two of them were female. This study shows that sex determination can be done in preimplanted embryos by using PCR which facilitates the transfer of embryos with desired sex when required in breeding. Key Word : Bovine, embryo, sex determination, PCR RÉSUMÉ Détermination du sexe des embryons bovins par PCR Cette étude préliminaire montre l’applicabilité de la technique de PCR pour la détérmination du sexe des embryons bovins dans les conditions de terrain en Turquie. Dans ce but, trois vaches ont été sélectionnées à partir de leurs résultats de fécondité après un examen clinique. Une superovulation a été induite après synchronisation de l’oestrus et les vaches ont été inséminées artificiellement. Six embryons ont été collectés par la technique de “flushing” utérin. Des biopsies ont été réalisées à l’aide d’une micro-lame sans l’usage d’un micromanipulateur après stabilisation des embryons par grattage du fond de la boîte de Pétri. La PCR a été pratiquée sur les échantillons issus des biopsies. Un produit de PCR de 279 bp a été amplifié à partir du DNA isolé du sang d’un taureau. Les mêmes amplicons de PCR ont été détectés chez quatre embryons au stade morula sur des vaches synchronisées. Au contraire, le produit de PCR n’a pas été amplifié à partir du DNA isolé des deux autres embryons eu du sang d’une vache. Le produit de PCR de 579 bp du gène bovin G3PDH amplifié a été détecté dans le DNA isolé du sang d’une vache et d’un taureau. Les résultats de PCR ont montré que parmi les six embryons en phase de morula des vaches synchronisées les quatres sont mâles alors que les deux autres sont femelles. Cette étude suggère que la détermination du sexe peut étre établie avec des embryons préimplantés par l’utilisation de PCR, ce qui facilite le transfert des embryons après sexage. Mots clés : Bovin, embryon, sexage, PCR